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Zellsorter
BD
FACSVantage
SE
FACSVantage
SE
von Becton Dickinson
Der Cell Sorter
FACSVantage SE von Becton Dickinson ist mit einem
wassergekühlten
Enterprise II
Laser von Coherent, mit dem der simultane Betrieb von 488 nm und
MultiLine UV
möglich ist, und einem luftgekühlten HeNe-Laser
(632,8 nm)
ausgestattet. Damit
steht im Vergleich zum BD LSR
eine zusätzliche
Wellenlänge (632,8 nm)
zur Lichtanregung zur Verfügung, mit der Fluoreszenzfarbstoffe
wie APC,
Cy5 oder TOTO-3 angeregt werden können. Acht Parameter (FSC,
SSC
und sechs
Fluoreszenzen) können simultan gemessen werden.
Das externe Wärme-
/ Kühlsystem des
Sorters
sorgt für eine verbesserte Zellvitalität und
Färbestabilität.
Mit einer
TurboSort Option lassen sich bis
zu
20.000 Zellen/s sortieren, mit der MakroSort Option Partikel bis zu
einer Größe
von 100 µm, z.B. Pollen. Die ACDU–Einheit
(Automated Cell
Deposition Unit)
erlaubt mit der CloneCyt Option nicht nur das Sortieren von Zellen in
Tubes,
sondern auch direkt auf einen Objektträger oder in eine
Kulturplatte, wie eine
96er Mikrotiterplatte.
Es
ist möglich, Zellen und Partikel steril zu sortieren.
Die
Mess- und Analysesoftwares CellQuest v3.3 und CloneCyt v1.0 laufen
auf einem Power Macintosh.
Der
Zellsortierer wird durch die Mitarbeiter
der Core Unit betrieben.
BD
FACSAria II SORP
Der BD FACSAria SORP (Special Order Research Product) ist ein
laserjustagefreies Tischsortiersystem der neuesten Generation mit einer
Quarzküvette, geschlossener Sortierkammer,
softwarekontrollierten
Sortiereinstellungen und volldigitalisierter Elektronik.
Die
Fluoreszenzempfindlichkeit
von 85 MESF-FITC und 29 MESF-PE (bei 70
psi und 90 kHz mit SPHERO Rainbow Calibration Particles) wird von
keinem anderen Sorter erreicht.
Der BD FACSASria
SORP der Core
Unit hat 5 leistungsregelbare Laser:
355 nm bis 60 mW
405 nm bis 100 mW
488 nm bis 100 mW
561 nm bis 150 mW
640 nm bis 100 mW.
In der jetzigen
Ausstattung
können bis zu 16 Fluoreszenzen
gleichzeitig detektiert werden.
Vier verschiedene
Nozzlegrößen von 70 bis 135
µm sind
vorhanden.
Es können
gleichzeitig bis
zu vier verschiedene Populationen
sortiert werden.
Die BD ACDU
Einzelzellablage
ermöglicht Zellen in Platten (6,
24,
48, 96 und 384 well) und andere Gefäße in vom Nutzer
frei
definierbare Raster abzulegen.
Ein
Wärme/Kühlsystem
erlaubt es, die
Sammelröhrchen oder
die Mikrotiterplatten der Einzelzellablage auf einer konstanten
Temperatur zu halten.
Analyser
BD
LSR II
Mit dem BD LSR II
verfügt
die Core Unit über eines
der
derzeit leistungsstärksten analytische Durchflusszytometer.
Das Gerät
hat vier
luftgekühlte Laser (355 nm - 20
mW, 409 nm
- 25 mW, 488 nm - 20 mW, 633 nm - 20 mW). Mit ihm können bis
zu
zwölf Parameter (Vorwärts- und
Seitwärtsstreulicht und
10 Fluoreszenzparameter) gleichzeitig detektiert werden. Für
den
488 nm-Bereich steht ein Octagon mit vier Fluoreszenzdetektoren zur
Verfügung, in den anderen Wellenlängenbereichen je
ein Trigon
mit je 2 Fluoreszenzdetektoren.
Im
Octagon (Anregung 488
nm) können mit den
vorhandenen
Filtern vier der folgenden Wellenlängenbereiche und damit z.B.
folgende Fluorochrome gemessen werden:
515 - 540 nm:
FITC, TOTO-1,
DRAQ5, Alexa Fluor 488, Vybrant DyeCycle
Green
562 - 588 nm: PE,
Cy3, Red613,
Vybrant DyeCycle Orange
600 - 620 nm:
PE-TR, PE-Alexa
Fluor 610
663 - 677 nm:
PE-Cy5, PerCP,
7AAD
675 - 715 nm:
PE-Cy5.5,
PerCP-Cy5.5, PE-Alexa Fluor 700
750 - 810 nm:
PE-Cy7, PE-Alexa
Fluor 750
Mit dem UV-Laser
können
u.a. DNA-Farbstoffe (DAPI,
Hoechst)
und Alexa 350 angeregt oder Ca-Flux-Messungen (Indo-1)
durchgeführt werden. Zur Lichtdetektion stehen zwei der
folgenden
Wellenlängenbereiche zur Verfügung:
425 - 475 nm
515 - 545 nm
>635 nm
bzw. um 670 nm
Der violette Laser
(409 nm)
ermöglicht neben der Verwendung
von
Quantum dots (z.B. Qdot 655 mit Emissionsmaximum bei 670 nm) auch eine
ideale Anregung z.B. von Alexa 405 oder Pacific Blue (Detektionsbereich
425 - 475 nm) und von Cascade Yellow (500 - 550 nm).
Im Trigon des
roten Lasers (633
nm) sind zwei der folgenden
Wellenlängenbereiche und die entsprechenden
Fluorochrome
(als Beispiel) messbar:
650 - 670 nm: APC,
Cy 5, Alexa
647
685 - 715 nm:
APC-Cy5.5, Alexa
680, Alexa 700
750 - 810 nm:
APC-Cy7,
APC-Alexa Fluor 750
Die Mess- und
Auswertesoftware
FACSDiVa 6.1.3 läuft auf einem
Windows XP-Rechner.
Das BD LSR II hat
eine
geführte Kammer und fixierte
Komponenten.
Nach Einweisung durch das Laborteam kann an dem Gerät
selbständig gearbeitet werden. Bei Mehr- und
Vielkanalmessungen
berät, betreut und misst das Team der Core Unit.
Kontrollen
für
Multicoloranalysen:
Neben den
üblichen
Kontrollen wie Blank und Isotypkontrolle
(siehe
Anwendungen) sind bei Multicoloranalysen zur Kompensation insbesondere
bei den Tandemkonjugaten spezielle Positivkontrollen notwendig. Die
Fluoreszenzintensität dieser Kontrollen muss mindestens so
stark
sein wie die der hellsten Probe. Am besten geeignet ist die Verwendung
von speziellen beads (z.B. BD CompBeads, werden von der Core Unit zur
Verfügung gestellt), die mit den entsprechenden
Antikörpern
(müssen zusätzlich von den Nutzern zur
Verfügung
gestellt werden) beladen werden können.
CompuCyte
LSC
Bei dem
Laser-Scanning-Zytometer (LSC) von CompuCyte handelt es sich um
ein objektträgergebundenes Zytometer. Es liefert,
ähnlich wie
ein analytisches Durchflusszytometer, z.B. das BD LSR II,
Streulicht- und Fluoreszenzintensitäten einzelner Zellen.
Der technische
Aufbau des
Geräts basiert auf einem BX50
Fluoreszenzmikroskop von Olympus. Zur Lichtanregung können ein
luftgekühlter Argon-Ionen-Laser (488 nm) und ein HeNe-Laser
(632,8
nm) verwendet werden. Die Laserstrahlen werden über einen
oszillierenden Spiegel abgelenkt und tasten nacheinander den zu
untersuchenden Bereich auf dem Objektträger ab. Der
Objekttisch
wird mit einem Schrittmotor mit 0,5 µm Schrittweite bewegt.
Neben einem
Vorwärtsstreulichtsignal (FSC) wird die
Fluoreszenzemission in vier Wellenlängenbereichen erfasst.
Eine
gleichzeitige visuelle Inspektion ist möglich. Die auf dem
Objektträger lokalisierten Zellen können nach einer
ersten
Messung erneut lokalisiert , nachgefärbt und nochmals gemessen
werden.
Die Konfiguration
des
Gerätes erlaubt die Detektion von
Fluoreszenzfarbstoffen, die in folgenden Wellenlängenbereichen
Licht emittieren:
grün
(515-545 nm),
orange (565-585
nm),
rot (600-635 nm)
und
crimson (650-700
nm).
Die Mess- und
Auswertesoftware
WinCyte auf PC / WindowsNT erzeugt in
jedem Kanal 14-bit-Daten in einem entsprechendem Flow Cytometry
Standard-(FCS-) Format.
Die Analyse der
Proben kann
nach Einweisung selbständig
durchgeführt werden. |
